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传染性胰脏坏死病预防和治疗方法

时间 : 03-27 投稿人 : Adrien 点击 :

传染性胰脏坏死病最早在加拿大、美国流行,危害很大;后来在丹麦、法国、希腊、英国、德国、挪威、意大利、瑞典、韩国、日本等国发生流行;20世纪80年代末又传入朝鲜及我国的台湾及东北、山西、山东、甘肃等地,仅在人工养殖条件下流行。幼鱼从开口吃食到3个月内为发病高峰,流行水温为10〜15℃。

传染性胰脏坏死病预防和治疗方法 | 养殖病虫害防治

危害美洲红点鲑、虹鳟、河鳟、克氏鲑、银大麻哈鱼、湖红点鲑、大西洋红、大鳞大麻哈鱼、七彩神仙鱼等观赏鱼类。主要危害全长数厘米的鱼苗及14〜70日龄左右的鱼种,病死率可髙达80%〜100%。1足龄鱼虽也患病,但一般病情较轻;全长超过15厘米的鱼,发病的可能性较小,但仍可被感染,呈隐性感染。

最重要的传染源是带病毒的成鱼,病后残存的鱼可以数年乃至终身成为带毒者。从肾、脾、肝、卵巢、精巢、粪便中都可以检出该病毒,其中以肾脏的检出率为最高。此病毒在河水、井水中,在4℃条件下能保持10天,15℃能保持5天;在4〜10℃的海水中,经4〜10周,感染力几乎毫不下降,5〜6个月后则下降99%;在室内干燥状态下,5周后还保留少量感染力,所以水和空气都可能是传播的媒介。波长254纳米的紫外线、2%氢氧化钠液等均可灭活病毒。从带有病毒的成鱼通过人工授精得到的卵往往是被病毒染的,这是该病发生的一个重要感染源。随卵一同被挤出或排出的卵液中含有比卵上更多的病毒。传染性胰脏坏死病可以经过卵而进行垂直传播;病毒也可以随病鱼的粪、尿、性腺分泌物排入水中,进行水平传播,经鳃及口而感染。同时,自然感染不只限于鲑科鱼类,许多非鲑科鱼类、贝类、甲壳类及鱼类的寄生吸虫,约20个科的成员也可被感染,但大多数为无症状的带毒者,这些都是传染源。

[病原]

传染性胰脏坏死病病毒(IPNV),属双RNA病毒属(Birnavirus),最明显的特征是胰腺坏死。病毒颗粒呈正20面体,无囊膜,有92个壳粒,直径50~75纳米,基因组是双股DNA,是已知鱼类病毒中最小的RNA病毒,病毒的浮力密度为每毫升1.33克,沉降系数为435S,病毒颗粒的分子量为55×106,全部衣壳蛋白重量为50.2×106;RNA为4.8×106,占病毒颗粒的8.7%;RNA在蔗糖梯度溶液中沉降系数为14S。病毒的结构蛋白按大小可分为三个等级,最大一个多肽重105000,占整个分子量4%,它是连接RNA的多聚酶;中等大小多肽重54000,占总重62%,它是主要的壳粒蛋白,抗体由它刺激产生;两个内部的小蛋白分别重31000,占总重28%和29000,占总重6%。现已知IPNV有VR299、Sp、Ab、He株等,这些株在血清学上、敏感性上及病原性上都有些不同病毒易在虹鳟性腺细胞株(RTG—2)、大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(CHES一214)、鲤上皮瘤细胞(EPC)等鱼细胞株上增殖,出现CPE;生长温度为4〜27.5℃,如在培养时温度慢慢地升高,病毒能在30℃生长;最适生长温度为15~25℃。病毒在胞浆内合成和成熟,并形成包涵体。病毒生长在RTG—2细胞株上,24℃5小时内产生新病毒,而15℃时产生新病毒需8小时,但此温度产生病毒量更多。病毒引起RTG—2细胞病变,26℃时在感染9小时后出现,20℃在感染18小时后出现,4℃需几天后才出现,20℃时2~3天就可看到空斑,核固缩,细胞变长,相互分离,并脱离瓶壁;但对病毒抵抗力强的细胞,核虽已固缩,仍贴在瓶壁上,因此空斑大多呈网状,特别是空斑的边缘,健全和变性的细胞相互混杂。

IPNV对乙醚及氯仿不敏感,对甘油也很稳定,能保存在50%甘油中数年以上;pH的忍耐范围是4~10;较能耐高温,在60℃的生理盐水中30分钟才失活;在过滤除菌的4℃水体,感染力可保持5〜6个月以上;在10℃自来水中,可保持7个月但在未经处理、且有藻类的水中,14天后就不能检测到病毒;大部分株能耐-20℃以下低温,冷冻干燥后,保存在4℃,至少在4年内不丧失感染力。对酸不敏感,pH3中30分钟,侵染率为100%;对碱敏感,pH11时侵染率仅0.01%。氯、福尔马林、碘、臭氧在一定浓度和时间以及pH在一定范围内都具有杀病毒作用。

[主要症状和病理变化]

主要危害鱼苗和幼鱼。分急性型和慢性型。患急性型的病鱼体色无大变化,肛门处拖着1条灰白色黏液便,病鱼游动失调,常突然离群狂游、翻滚、旋转,间歇片刻后又重复做以上游动,直到死亡;从转动到死亡仅需1〜2小时;腹部紫红,鳍基部有出血点。慢性病鱼体色发黑,突眼,腹鳍基部充血,腹部膨胀,有腹水,肝、脾水肿并变白,胰脏坏死,消化道内无食物,且充满黄色的黏液,胃幽门部出血,消化道的黏膜发生变性、坏死、剥离。

[诊断要点]

1.现场诊断根据症状及流行情况进行初步诊断。

2.实验室诊断

(1)病理学检查显微镜检查病鱼胰脏的组织切片,可以看到胰脏坏死,胞浆内有包涵体,电镜检查可见六角形病毒颗粒。

(2)病毒分离用虹鳟性腺细胞细胞株(RTG—2)分离病毒,15℃培养4天后染色,可以看到空斑及细胞病变,根据空斑及细胞病变特点,可以作进一步诊断。

(3)免疫学诊断

:①中和试验由于传染性胰脏坏死病毒的血清型很多,作为诊断有必要使用多价抗血清。美国东部鱼病研究所巳制成了多价抗传染性胰脏坏死病毒血清。

②补体结合法采用已知病毒可溶性抗原以测定病鱼血清中有无相应抗体。此法的特异性较中和试验低,但由于补体结合抗原出现早、消失快,故可用于早期诊断。

③直接荧光抗体法能迅速、正确地检出在组织及培养细胞内的病毒。用虹鳟性腺细胞,20℃培养3〜4小时就可以检出,且血清型不同株间不会引起交叉反应。

④酶联免疫吸附试验在发病季节,可以在3〜4小时内确诊流行病是否由传染性胰脏坏死病毒引起;鱼卵可以在48小时左右确定是否被传染性胰脏坏死病毒污染;对外观无症状的病鱼,可以在24小时左右检测血中是否有抗传染性胰脏坏死病毒的抗体。该方法具有速度快、灵敏度高、特异性强、操作方便、可在野外应用等优点。中国科学院水生生物研究所鱼病室病毒组已制备出试剂盒,可供相关单位使用。

⑤免疫过氧化物酶技术刘英等(1995)报道,该方法特异性强、快速、简便,可作为早期检测和诊断用。

⑥寡核苷酸脱氧核糖核酸探针检测周建玲等(1995)报道,采用生物素标记寡核苷酸脱氧核糖核酸探针检测有成本低、方法简便、检测速度快(检测工作可在10小时内完成〉、对人体无危害(放射性探针检测鱼病毒,需2天以上的放射自显影时间,放射性同位素标记的探针不稳定,对人体有危害,需特殊的实验室条件和污物处理技术等),此探针不与同科的病毒发生交叉反应,故有较强的种间特异性等优点。该方法目前存在的主要问题是灵敏度较差;探针不能鉴别传染性胰脏坏死病毒不同血清型,幸好迄今为止,所有血清型的传染性胰脏坏死病毒都是致病的,都是检测对象。

[防治措施]

1.预防措施

(1)加强综合预防措施,严格执行检疫制度,不将带有传染性胰脏坏死病毒的鱼卵、鱼苗、鱼种及亲鱼运入。国际动物卫生法典对虹鳟鱼类的进出口有所规定,要求既无临床症状或病理剖解变化,又在个月内不再发现病情的鱼场才允许其进出口。此外,还要求利用细胞培养的方法在鱼池水、出口鱼的鱼池水、出口鱼的鱼卵、精液及体腔内不再检出病毒。

(2)建立基地,培育无传染性胰脏坏死病毒的鱼种,严禁混养未经检疫的其他种类的鱼。

(3)发眼卵用每立方米水体中放1%聚烯吡酮碘(聚乙烯吡咯烷酮碘、PVP一1)液500毫升,药浴15分钟。如水的pH高,需加1%聚烯吡酮碘液600~1000毫升。经该方法处理后的鱼卵孵出的鱼苗,有时仍发生传染性胰脏坏死病,可能是传染性胰脏坏死病毒还在卵内,或在药液难以到达的典表面的某些部位。

(4)用传染性胰脏坏死病灭活疫苗浸浴、口服或注射方法免疫易感鱼类的苗种。

(5)据报道,2500尾体重0.4克的仔鱼投喂6毫克植物血细胞凝集素,拌饲分2次投喂,间隔15天,对预防传染性胰脏坏死病有一定效果。

2.治疗方法疾病早期,外泼消毒药2〜4次,同时内服颗粒药词7〜10天,有一定效果。

(1)外用药

①全水族箱泼洒三氣异氰脲酸,每立方米水体放药0.2毫升。

②全水族箱泼洒二氧化氯,每立方米水体放药1克(先加柠檬酸活化)。

③用每立方米水体加0.8克的40%的甲醛整个水族箱泼洒,3天后再每升水体加0.2毫克的此药再泼洒一遍。或用每立方米水体加0.8〜1克漂白粉水族箱泼洒。

(2)内服药

①每吨饲料中加5.5~6.4克聚烯吡酮碘,拌匀后制成水中稳定性好的颗粒药饲投喂。

②每千克饲料中加大黄、板蓝根等中草药200克,拌匀后制成水中稳定性好的颗粒药饲投喂。

(3)低温饲养一般在水温10℃以下可减少传染性胰脏坏死病的发生和降低死亡率。因此可将病鱼放在低水温的环境中饲养,以控制疾病的发展;或在发病季节将易感幼鱼放在低水温中饲养,待发病期过后再迁回,但这种方法较难推广。

[诊疗注意事项]

药物使用:改变传统的用药习惯,交替使用各种药物,以防鱼体产生耐药性。福尔马林不能与漂白粉、髙锰酸钾、生石灰等混合使用。

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