今年台风“苏罗迪”后，福建长乐对虾发光病严重，笔者针对发光死虾主要采用了病原分离、人工感染等方法，对荧光菌感染途径进行探究，并提出了初步的防治方法。
健康对虾：肠胃饱满、肝胰腺充实、体色透明
对虾发光病是一种在对虾养殖中常见的细菌性疾病，它具有发病快、传播广、感染力强、致死率高、防治困难等特点，是对虾养成期间危害较大的流行病之一。我国对虾发光病主要发生于福建、广东、广西等沿海地区，主要危害凡纳滨对虾(Penaeusvannamei)和斑节对虾(Penaeusmonodon)。目前的研究表明，引起对虾发光病的病原有霍乱弧菌(V．cholerae)、灿烂弧菌(V．splendidus)、火神弧菌(V．logei)、哈维氏弧菌(V．harveyi)和费氏弧菌(V．fischeri)5种，但其主要病因是哈维氏弧菌感染。
今年台风“苏罗迪”后，福建长乐对虾发光病严重，笔者针对发光死虾主要采用了病原分离、人工感染等方法，对荧光菌感染途径进行探究，并提出了初步的防治方法。
一、研究方法
1、细菌分离
将采自福建长乐某养殖场已经死亡的发光病虾，体表用75%乙醇消毒后，用无菌解剖刀在超净工作台上切开病虾腹肌肉，用TSA和TCBS固体培养基对肌肉进行细菌划线分离，30℃培养24h后观察菌落生长情况。
挑取TSA和TCBS培养基上的典型菌落，再次划线纯化后分别接种于含2%NaCl的TSB中，30℃振荡培养10h，OD560测定细菌浓度，然后分别拌料投喂，每克饲料含细菌数量为106cfu，每组40尾，对照组直接投喂，将南美白对虾放在蓝色玻璃桶（0.3m3）中饲养。
2、人工感染
将取自长乐某养殖场的健康对虾(体长6-8cm)饲养于蓝色玻璃钢桶（0.3m3），养殖用水为沙滤水，盐度30‰，水温22-24℃，暂养4d，每组30尾虾。
（1）投喂感染：将试验菌株的菌悬液（108cfu/mL）拌料制成试验对虾做饵料,浓度分别为102cfu/g、104cfu/g、106cfu/g，饲养、观察5天，记录对虾死亡情况及发病症状，并及时移去死虾。
（2）创伤浸泡感染：将经活化的新鲜试验菌悬液(108cfu/mL)加入试验用蓝色玻璃钢桶内，充气搅拌使海水分别为102cfu/mL、104cfu/mL、106cfu/mL，然后用针头在健康试验对虾腹肌上刺扎，造成创伤后放入带菌的海水中。
（3）普通浸泡感染：方法同（2），不同的是不用将试验虾刺扎，直接将其放入带菌海水中。
严重感染（感染后第2、3天）：游动缓慢、有明显的胃炎、肝胰腺萎缩、体色明显发红
二、结果
1、分离与回归感染
从发病虾苗体内分离纯化到3株优势菌A－1、A－2、A－3在TCBS培养基上颜色分别为绿色、黄色、黑色，在暗室只有A－1菌株发淡绿色荧光。经回归感染试验证实，A－1能引起南美白对虾死亡且死虾发光，其症状与自然发病成虾的症状相同，而其他优势菌均不能使死虾发光，因此证实该菌为对虾发光的致病菌之一。
2、人工感染
（1）投喂感染：拌料投喂感染的实验结果见表1。结果表明：对照组实验期间没有发生死亡；102cfu/g组在第3天对虾开始死亡，实验结束时，共死亡22尾，占73.3%；104cfu/g组在第2天开始死亡，实验结束时，共死亡29尾，占96.7%；而106cfu/g在第2天出现死亡，在第4天已全部死亡。由此可见，饲料中荧光菌数量与对虾死亡速度呈正相关。
（2）创伤浸浴感染：创伤浸浴感染的实验结果见表2。结果表明：对照组没有发生死亡；102cfu/mL组在第4天开始死亡，实验结束时，共死亡20尾，占66.7%；104cfu/mL在第3天开始死亡，实验结束时，共死亡25尾，占83.3%；106cfu/mL组在第2天开始死亡，实验结束时，全部死亡。由此可见，水体中的荧光菌数量与对虾死亡速度呈正相关。
（3）普通浸浴感染：普通浸浴感染的实验结果见表3。结果表明：对照组、102cfu/mL组、104cfu/mL组均没有发现死亡；106cfu/mL组在第4天开始死亡，实验结束时，共死亡2条，占6.7%。由此可见，健康对虾在含荧光菌的海水中不易被感染。
三、讨论
投喂感染的实验结果表明，即使饲料中含有少量的发光细菌，仍然可以在较短的时间里，使对虾大量死亡，这说明摄食感染是荧光菌感染健康对虾最主要的感染方式。
对虾的捕捉搬运、受惊吓以及频繁活动，都有可能造成虾体创伤，发光菌侵入虾体后，利用机体组织作为营养物质进行大量繁殖，并在荧光素酶的作用下使还原型荧光素氧化成氧化型荧光素，同时放出荧光，因而我们可见对虾局部组织发白发光。大量繁殖的发光菌随着虾体的循环系统逐渐侵入到虾体全身器官，遍布全身就使得虾体全身死亡并发光。创伤感染的实验结果表明，当水体中的荧光菌含量在102cfu/mL，仍然会有超过60%的虾发病死亡，这说明创伤感染也是荧光菌感染健康对虾的一种重要途径。
本研究中普通浸浴感染的实验结果表明，当荧光菌浓度浓度达到106cfu/mL，会导致少量对虾死亡，而当浓度低于104cfu/mL时，不会引起对虾死亡，在高位池中荧光菌数量一般不会超过102cfu/mL，所以说健康对虾在含有荧光菌的虾池较难感染发病，这说明普通浸浴感染不是引起对虾发光的主要途径。
因此，防治南美白对虾成虾发光病需从切断摄食感染和创伤浸浴感染途径着手。
在高位池中，可先进行消毒，后加芽孢杆菌、光合细菌，同时投喂优质饲料的方法来切断这两种主要的感染途径。消毒的作用是杀死病虾、弱虾、虾创伤部位的细菌和养殖环境中细菌，减少病原体的来源；消毒后及时捞起死虾，避免摄食感染；加芽孢杆菌、光合细菌的作用是消毒导致养殖环境中细菌大量死亡，养殖水体的菌相处于“真空”状态，添加有益细菌，能够迅速占据有害细菌的生态位，使有害菌处于被抑制的状态；投喂优质饲料的目的是提高养殖对虾的健康程度，尤其是提高对虾的免疫力，有效降低感染的概率。
来源：水产前沿（微信号：fishfirst）
作者：福建大北农水产科技有限公司黎东
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