徐佳璐1 战海枫2 陈义飞3
（1.哈尔滨市粮食研究所 150070，2.黑龙江省牡丹江市粮油卫生检验监测站 157099，
3.黑龙江省大庆市粮食质量检验监测站 163001）
测定饲料中粗蛋白含量一般使用凯氏定氮法，其原理是在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵，再加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，从而计算出粗蛋白含量。通过对2012年产的一份玉米样品的检验，来比较分析高氯酸-硫酸消化法和混合催化剂法这两种常用方法，供参考。
1 实验方法
选取具有代表性的试样用四分法缩减至200克，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，以高氯酸-硫酸消化法为A组，用25毫升锥形瓶称量3组平行样品。同时设置2组空白组，以蔗糖作为空白。准确称量样品0.5克，精确到0.1毫克。具体质量为，A1组0.5008克，A2组0.5002克，A3组0.5006克，空白A1组0.5001克，空白A2组0.5003克。以混合催化剂法为B组，用50毫升凯氏瓶称量3组平行样品。同时设置2组空白，以蔗糖作为空白。准确称量样品0.5克，精确到0.1毫克。具体质量为，B1组0.5007，B2组0.5005克，B3组0.5002克，空白B1组0.5007克，空白B2组0.5004克。向A组样品中分别滴加5滴蒸馏水润湿，再添加6毫升浓度为98%的浓硫酸，加入6滴60%高氯酸，以电阻丝消煮2分钟，冷却后再加入4滴60%高氯酸，反复消煮5次，后3次高氯酸加入量依次为3滴、2滴、1滴。溶液颜色逐渐变浅，直至无色透明。定容至100毫升。向B组样品中分别加入混合指示剂6.4克（0.4克五水硫酸铜，6克硫酸钾），与试样混合均匀，再加入12毫升浓度为98%的浓硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360~410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2小时。冷却后定容至100毫升。
将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20毫升硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10毫升注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10毫升浓度为40%的氢氧化钠水溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4分钟降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1分钟，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。对两组样品及空白分别重复此操作。
蒸馏步骤的检验。精确称取0.2克硫酸铵，代替试样，按蒸馏步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。蒸馏后的吸收液立即用0.01摩尔/升盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
2 结果
蛋白质（%）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V′/V）×100（www.nczfj.com），式中V2表示滴定试样时所需标准盐酸溶液体积（毫升）；V1表示滴定空白时所需标准盐酸溶液体积（毫升）；c表示盐酸标准溶液浓度（摩尔/升）；m表示试样质量（克）；V表示试样分解液总体积（毫升）；V′表示试样分解液蒸馏用体积，毫升；0.0140与1.00毫升盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000摩尔/升〕相当，以克表示的氮的质量。6.25为氮换算成蛋白质的平均系数。滴定使用的盐酸标准溶液浓度为0.01018摩尔/升。计算其粗蛋白百分含量。A组粗蛋白含量分别为4.87%，4.84%，4.88%；B组粗蛋白含量分别为4.84%，，4.88%，4.91%，分别对两组结果求平均值，得到使用高氯酸——硫酸消化法测得该玉米样品的粗蛋白含量为4.86%，使用混合指示剂法测得该玉米样品的粗蛋白含量为4.87%，经平均数检验结果为无显著性差异（P >0.05）。
3 小结
混合催化剂法的优点是可以避免消化过程中氮的损失，而且能够随意加大或者减小火力来控制消化过程，测定结果的精确性非常接近标准值。但是存在消化过程中容易喷出，安全性比较差，消化时间太长的缺点，测定一个样品至少需用4到5个小时才能够完成。而高氯酸-硫酸消化法可以大幅度缩短检测时间，从称量到消煮再加上蒸馏滴定最后计算，只需花费2小时即可得出测定结果。
