仇建华1 鞠晓峰1 段 红1 高俊峰2 冉旭华1 侯美如2 王春仁1
（1.黑龙江八一农垦大学 黑龙江大庆 163319，2.黑龙江省兽医科学研究所 黑龙江齐齐哈尔 161000）
作者简介：仇建华（1966-），女，研究员，本科。
通讯作者：王春仁（1965-），男，教授，博士。
基金项目：黑龙江省教育厅资助黑龙江省教育厅科学技术研究项目，土耳其斯坦东毕吸虫雌雄虫消减文库的构建及性别差异新基因的克隆分析，项目编号：11551311
土耳其斯坦裂体吸虫主要寄生于牛、羊等反刍动物的门静脉和肠系膜静脉。该病在我国流行时以东北和内蒙古较为严重。慢性感染可引起家畜腹泻、贫血、水肿，发育不良，影响受胎或发生流产。急性感染可引起牛、羊大批死亡，给畜牧业带来较大经济损失。因此土耳其斯坦裂体吸虫病是重要的寄生虫病。
1 诊断
1.1 临床诊断
根据患畜贫血、消瘦、腹泻、水肿等临床症状结合流行病学调查进行诊断。在流行区家畜出现以上临床症状时可以怀疑感染了土耳其斯坦裂体吸虫，但不能确诊。如果要确诊，需要进行实验室检查。
1.2 病原检查
虫卵检查法：采用粪便水洗沉淀法。因土耳其斯坦裂体吸虫成熟雌虫子宫内只有一个虫卵，又寄生于肠系膜静脉和肝门静脉内，排卵量很少，因此在粪检时应采集较多的粪便。通常取患畜粪便50~100克加入烧杯内，加适量水混匀后40~60目铜筛过滤，经20~30分钟沉淀后，倒掉上次液体，如此反复水洗沉淀三次，吸沉渣镜检。虫卵为椭圆形，呈淡黄色，一端有附属物，另一端有小刺，内含有一毛蚴。检查时应注意，如果在炎热的夏天可用0.9%生理盐水代替常水，并将待检样本放入4℃冰箱中，防止毛蚴过早孵出影响检验效果。
毛蚴孵化法：由于土耳其斯坦裂体吸虫虫卵很少，因此虫卵检查时检出率很低，现多采用虫卵检查阴性者再用毛蚴孵化法复核的方法。取患畜新鲜粪便50~100克，反复洗涤沉淀或尼龙筛兜内清洗后，将粪便沉渣倒入三角烧瓶内，加清水至瓶口。在20~30℃的条件下，经3~5时后用肉眼或放大镜观察，如在离瓶口2~3厘米处有白色点状物作直线来往游动，即是毛蚴。必要时也可以用吸管将毛蚴吸出镜检。
虫体检查法：牛、羊死亡或扑杀后，在肠系膜静脉和肝门静脉内检出大量土耳其斯坦裂体吸虫即可确诊。此法简单、实用，但需要剖检动物，主要适合疾病确诊。
1.3 免疫学检测
目前，用于土耳其斯坦裂体吸虫病的免疫诊断方法主要包括间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、酶联免疫印渍技术和斑点免疫金渗滤法。
间接血凝试验（IHA）：使用虫体粗抗原或纯化抗原检测土耳其斯坦裂体吸虫抗体效果较好。张世英等使用虫体粗抗原对100多只羊试验表明，此法较毛蚴孵化和粪便虫卵检查简易快速，特异性强，敏感性高，阳性符合率大约为86%[1]。耿进明等首次使用Sephadex G200柱层析将虫体粗抗原进行了部分纯化，初步建立了使用IHA诊断牛、羊土耳其斯坦裂体吸虫病的方法，并对62份阳性血清，25份阴性血清分别进行了检测，阳性符合率可达96.8%，阳性符合率为96%，具有较强的特异性和较高的敏感性[2]。
酶联免疫吸附试验（ELISA）：刘振玲和赵辉元应用ELISA检测绵羊抗土耳其斯坦裂体吸虫抗体取得了满意结果，阳性符合率为98.4%，阴性符合率为95%，比沉淀法、孵化法分别高57.55%和24.25%，在特异性方面，仅与肝片吸虫有4.8%的交叉反应，未发现与矛形双腔吸虫、前后盘吸虫有交叉反应[3]。耿进明等用碳酸钠溶液包被土耳其斯坦裂体吸虫的可溶性抗原于聚苯乙烯板，采用待检血清和酶标的二抗进行ELISA试验，结果表明ELISA与IHA及毛蚴孵化法相比检出率最高，与刘振玲等实验结果相一致，证明ELISA检测土耳其斯坦裂体吸虫抗体具有较高的敏感性[4]。
酶联免疫印渍技术：该法是通过粗提土耳其斯坦裂体吸虫的可溶性抗原进行聚丙烯酰氨凝胶电泳，然后电转印到硝酸纤维素膜上，加入待检血清和酶标的二抗底物显色，阳性血清即可在膜上显色。该法可用于土耳其斯坦裂体吸虫的免疫诊断，极大地提高了检测的特异性和灵敏性，达到纳克级水平[5]。
斑点免疫金渗滤法：王春仁等应用该法检测羊土耳其斯坦裂体吸虫，在特制的醋酸纤维摸上进行免疫学反应[6]，该法与解剖法阳性符合率为98.35%，阴性符合率为97.78%，与ELISA法检测结果相似；除与肝片吸虫阳性血清有2.86%交叉反应外，与前后盘吸虫、胰阔盘吸虫阳性血清没有交叉反应，其阳性检出率明面高于沉淀法、孵化法和IHA法，本法具有操作简单、反应快速、灵敏性强、重复性好、检出时间早，而且标记好的诊断试剂盒可在4~10℃可贮存1年。
以上四种方法中使用的抗原均是成虫抗原和虫卵抗原，成分复杂且抗原制备成本高、周期长，需要使用实验动物宿主，存在实验动物安全的危险并且不易大量获得，且诊断抗原不易标准化生产等缺点，因而也就限制了该方法的进一步应用。因此，寻找土耳其斯坦裂体吸虫病诊断用有效抗原及建立良好的诊断方法成为迫切和必要的任务。分子生物学的飞速发展，使这种愿望成为可能，科技工作者已开始致力于土耳其斯坦裂体吸虫分子生物学的研究工作，并取得了一些成绩。已开始利用具有诊断功能基因制备的重组抗原[7]，为建立敏感、特异、（www.nczfj.com）快速的免疫学诊断方法奠定基础。
2 治疗
土耳其斯坦裂体吸虫病最早采用锑273、酒石酸锑钾、苏酒雄合剂、猫眼草等药物进行治疗，这些药物或毒性较大或疗效不确实，现已不用。20世纪70年代末有人开始使用硝硫氰胺、硝硫氰醚等药物治疗牛、羊土耳其斯坦裂体吸虫病。采用2%硝硫氰胺治疗牛土耳其斯坦裂体吸虫病，一次用药可使虫体失去活动能力，吸盘无力，丧失吸附作用，性器官退化和虫体萎缩死亡。采用10%硝硫氰醚水悬液给牛三胃注射用药，剂量为15毫克/千克体重，其灭雄率达99.4%，灭雌率100%。但这两种药物毒副作用较强，有时可以引起动物强烈的反应，甚至中毒、死亡，因此，现已很少使用。之后采用治疗吡喹酮治疗牛、羊土耳其斯坦裂体吸虫病，应用吡喹酮采用口服和三胃投药方式给牛、羊用药。结果表明羊按20~40毫克/千克体重口服，其肝移率为78.6%~94.7%，牛按30毫克/千克体重的剂量口服，其肝移率为81.9%，按15毫克/千克体重的剂量，三胃用药其肝移率达99.1%，牛三胃用药量是口服用药量的一半，而且效果也较口服用药好。
王春仁等采用抗血吸虫Ⅱ号按30毫克/千克体重的剂量治疗自然感染土耳其斯坦裂体吸虫的绵羊和黄牛，结果表明绵羊一次用药虫卵转阴率为85%，虫卵减少率为95.55%。牛一次用药，虫卵转阴率为80%，虫卵减少率为93.6%，残余虫卵变形，毛蚴孵化率降低。有人使用自行研制了含10%吡喹酮的吸虫净注射液，牛、羊按10~20毫克/千克体重，一次肌肉注射，灭虫率和驱虫率达99.5%~100%。
3 预防
在控制本病的发生和流行上，应采取综合性防治措施。尤其要了解不同地区引起本病蔓延的流行病学规律和特点，制定因地制宜的具体措施。
严禁家畜接触和饮用疫水，特别在流行区里不得饮用池塘、水田、沟渠、沼泽和湖泊里的水，最好给家畜设置清洁饮水槽，饮用井水或自来水。由于土耳其斯坦裂体吸虫虫卵只有接触水才能孵出毛蚴感染椎实螺，因此防止患畜粪便污染水源是预防该病的重要环节，为此要加强粪便管理，将粪便堆积发酵，杀灭虫卵。
根据当地地理和气候特征，结合春秋防疫，选用吡喹酮给牛、羊驱虫。春季驱虫可以防止土耳其斯坦裂体吸虫虫卵随粪便传播污染草原，秋季驱虫可以保证动物安全越冬。在多雨季节，应在感染季节反复用药数次。有条件的牧场可采取粪便定期检查方法，随时发现随时驱虫，以减少病原扩散。
在实际中，根据椎实螺的生态学特点，因地制宜，结合农牧业生产采取有效的措施，改变螺类的生存环境，进行灭螺，也可以使用硫酸铜、五氧酚钠、氧乙胺等杀螺剂灭螺，但要防止人畜中毒，污染环境。最好的方法是养殖水禽进行生物灭螺。
根据螺类生存时间和活动规律，确定安全放牧期。在放牧安全期内，可在污染牧地上放牧，其余时间应该在没有被污染的草地上放牧，有条件的牧场可以实行轮牧。
参考文献：
[1] 张世英, 沈杰, 方渭民，等.羊东毕吸虫病诊断方法的研究[J]. 兽医科技杂志,1984,1:23-25.
[2] 耿进明, 史学增, 周贵.应用间接血凝诊断牛东毕吸虫病.吉林农业大学学报[J],1991, 13(4):59-63.
[3] 刘振玲, 赵辉元. 应用ELISA检测绵羊抗东毕吸虫抗体[J].中国兽医学报，1987,03：31-34.
[4] 耿进明, 朱莉, 史学增, 等. 应用酶联免疫吸附试验诊断牛东毕吸虫病的初步研究[J]. 吉林农业大学学报, 1994, 16(8): 88-100.
[5] 史学增, 周贵, 王淑敏, 等. 用ELIB诊断牛东毕血吸虫病的研究[J]. 中国兽医寄生虫病, 1995, 3:17-19.
[6] 王春仁, 许腊梅, 王洪新, 等. 应用斑点免疫金渗漏法检测羊东毕吸虫病的研究[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2000, 5: 24-25.
[7] 宿文文, 张莹, 那璐, 等. 土耳其斯坦裂体吸虫23kDa蛋白基因的序列分析及抗原表位预测[J]. 黑龙江八一农垦大学学报，2014,26(4):26-29.
