鱼诺卡氏菌是一种广泛存在于水环境中的放线菌，感染鱼后可导致皮肤溃疡，鳃、头肾、体肾、脾、肝等部位出现大量白色结节状结构。到目前为止，已经从病鱼中分离出三种致病的诺卡氏菌，包括星状诺卡氏菌，鰤鱼诺卡氏菌和杀鲑诺卡氏菌。值得注意的是，鰤鱼诺卡氏菌是近年来鱼诺卡菌病分离最频繁的病原菌，已被鉴定为鱼诺卡菌病的主要病原菌。对于该病的治疗，目前尚没有有效的治疗措施，基本通过药物的预防和抗生素治疗。相比之下，疫苗在水产养殖中具有安全性、环境友好性和长期有效性保护方面的优势。今天给大家介绍鰤鱼诺卡氏菌中两种潜在的DNA疫苗对于预防诺卡氏菌病的效果，文章引用信息如下：
本研究利用鸟枪法质谱(MS)技术，从鰤鱼诺卡氏菌胞外产物中鉴定了DnaK和GroEL的分泌蛋白。DnaK和GroEL属于热休克蛋白家族(HSPs)，也分别被称为Hsp70和Hsp60。几乎所有细菌中都存在DnaK和GroEL的同源物，它们在调节细胞内蛋白折叠以保证其正常功能方面起着关键作用。此外，越来越多的证据表明，来自不同致病菌的细胞外DnaK和GroEL蛋白在宿主体内起保护和调节作用免疫反应。文章研制了DnaK和GroEL两种DNA疫苗，并对其保护效果在杂交黑鱼进行了研究与比较。
文章技术路线如下：
结果：
结果表明，从鰤鱼诺卡氏菌序列中推断出的DnaK蛋白的氨基酸序列在细菌中具有高度的同源性，与N.niigatensis序列的同源性为97.88%，与大肠杆菌相似度为60.54%。GroEL与N.niigatensis的同源性为99.07%到与大肠杆菌的同源性为60.72%。系统进化树表明，鰤鱼诺卡氏菌的DnaK和GroEL蛋白序列与N.niigatensis聚为一支，表明它们在功能上可能有相似作用。
采用RT-PCR方法，对接种后鱼的肌肉、头肾、脾脏和肝脏中DnaK和GroEL基因的转录进行分析。,分别。在这些组织中，DnaK和GroEL基因的转录均在7d.p.v.首次检测到，pcDNADnaK组和pcDNA-GroEL组在35d.p.v.内连续检测到，而PBS组和pcDNA组未检测到。
图3接种黑鱼血清非特异性参数
血清LYZ、POD、ACP、AKP和SOD活性的非特异性参数升高提示，pcDNA-DnaK和pcDNAGroELDNA疫苗均可诱导杂交黑鱼产生非特异性免疫应答。
图4用酶联免疫吸附法(ELISA)测定杂交黑鱼血清中细粒棘球蚴特异性抗体(IgM)水平
与PBS组和pcDNA组相比，pcDNA-dnak组和pcDNA-groel组IgM水平均较高，接种后第1周至第5周差异极显著(p<0.01)。pcDNA-GroELDNA疫苗诱导的特异性抗体(IgM)峰值水平高于pcDNA-DnaKDNA疫苗。
图5免疫相关基因表达的qRT-PCR分析
结果表明，pcDNA-dnak组和pcDNA-groel组与PBS组和pcDNA组相比，免疫相关基因的表达水平均有显著提高。
图6用pcDNADnaK、pcDNA-groel、pcDNA或PBS接种的杂交黑鱼经过N.seriolaeZJ0503的攻毒试验14d后的存活率
pcDNA-Dnak和pcDNA-Groel接种组的杂交黑鱼成活率分别为74.00%和89.33%，pcDNA和PBS接种组的累积成活率分别为45.33%和44.67%。接种pcDNA、pcDNADnaK和pcDNA-groel的杂交黑鱼的RPS分别为1.19%、53.01%和80.71%。
本研究对pcDNA-DnaK和pcDNA-GroELDNA疫苗诱导的免疫应答进行了研究，并比较了这两种DNA疫苗对杂交黑鱼N.seriolae感染的保护作用。pcDNA-DnaK和pcDNA-GroELDNA疫苗均可促进先天应答、体液免疫应答和细胞免疫应答，说明DnaK和GroEL是有希望的鱼类诺卡菌病候选疫苗，这些发现将促进鱼类诺卡菌病疫苗的开发。
