作者：辽宁医学院畜牧兽医学院 王东梅王维新
摘要将以黄芪为主药并加入另外5味中草药所配伍的复方中草药粉碎制剂，以质量分数分别为1%、2%、3%和4%的剂量添加于基础饲料中，连续投喂刺参24d，以基础饲料饲喂组为对照。于投喂后第7天、第10天、第14天、第18天和第24天测酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）与超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果表明：投喂后24d内，各试验组ACP、NOS与SOD活性均随时间延长先升高后降低，AKP活性随时间延长而升高。2%复方中草药组的ACP活性在投喂后第14天活性最高，值为2.91U/100mL；SOD活性在投喂后第18天最高，值为137.08U/mL；投喂后第24天时AKP活性最高，为3.05金氏单位/100mL。与对照组具有显著性差异；1%复方中草药组的NOS活性在投喂后第18天最高，值为10.76U/mL，与对照组具有显著性差异。研究结果表明：饲料中添加复方中草药能提高刺参免疫，建议其适宜添加量为2%复方中草药。
关键词刺参复方中草药酸性磷酸酶碱性磷酸酶一氧化氮合酶超氧化物歧化酶
刺参具有较高的经济价值和药用价值，现已成为中国北方水产养殖业的重要养殖品种之一。然而近几年刺参细菌性与病毒性疾病大范围发生，造成刺参养殖产业损失惨重。刺参疾病防御已成为当务之急。目前，抗生素及化学药品治疗给动物自身、动物产品及环境带来一系列的问题。如：动物病原菌产生抗药性，引起内源性感染和二重感染，特别是长期使用会造成消化道内微生态失调和环境污染，同时药品在生物中的残留还直接影响人类健康。因此，国家对这类药物的使用已作了严格的限制。
近年来应用免疫增强剂来提高水产动物机体免疫力的研究应运而生，有关海参免疫增强剂方面的研究已有一些报道，如：饲料中添加甘草酸可以提高刺参的非特异性免疫力和抗病力。现已证明有超过200种中草药含有多种免疫活性物质，这些免疫活性物质能调节动物机体的免疫功能，中草药已被广泛地应用于水产养殖中。穿心莲、大青叶和金银花等复方中草药可以有效抑制或杀灭刺参病原菌，增强刺参非特异性免疫功能；吴亚楠等以黄芪和党参为主药制成的复方中草药可以显著提高刺参的免疫力和抗病力。试验以黄芪为主药并加入另外4味中草药制成复方中草药制剂，研究口服不同剂量复方中草药对刺参体腔液中酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）及超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响，旨在将中草药用于刺参养殖中，为刺参的绿色健康养殖提供保障。
1材料与方法
1.1材料
健康刺参购于辽宁锦州金域刺参良种场，体长（4.0±0.35）cm，体质量（3.0±0.45）g。将刺参饲养于12L塑料水槽中，水温（17±1）℃，pH（8.1±0.2），海水盐度为29±2，每箱饲养20头刺参，日投喂1次稚参饲料（下午16：00）并换水30%。驯养1周后用于试验。
复方中草药配方：以黄芪为主药，五味子、当归、野菊花和甘草4味中草药为辅药。所用中草药购自锦州健康源大药房，粉碎后过100目筛。将粉碎后的中草药分别以质量分数为1%、2%、3%和4%的比例添加到基础饲料中。
1.2试验设计
试验分5个处理组，分别为对照组（A组），投喂基础饲料；1%（质量百分比）复方中草药组（B组）、2%复方中草药组（C组）、3%复方中草药组（D组）和4%复方中草药组（E组），每组设3个平行，每平行饲养20头刺参。采用口服法对其投喂24d。投喂期间仍每天按时换水并测量温度、盐度和pH等各项水质指标，定时观察刺参生长及健康状况。分别于投喂后第7天、第10天、第14天、第18天和第24天测定刺参各种免疫指标。
1.3样品制备
每次从各组中取出2头刺参，分别从刺参腹部靠近肛门约1cm处抽取体腔液，匀浆器研磨后离心（4000r/min，4℃，10min），取上清液，4℃保存。
1.4酶活性的测定
ACP、AKP、NOS和SOD活性使用试剂盒测定。ACP、AKP和NOS活性按照血清中此酶检测方法测定；SOD活性按照血清中总超氧化物歧化酶活力法测定。NOS和SOD测定时取样量为20μL。
1.5数据处理
数据用SPSS13.0软件进行单素方差分析（One-wayAN0VA），结果以平均值±标准差表示，当P<0.05时认为差异显著。
2结果与分析
2.1复方中草药对刺参ACP活性的影响
从图1可见：复方中草药各试验组在投喂后24d内ACP活性呈现的是先升高后降低。其中第14天，C组ACP活性达到最高值为2.91U/100mL，是A组的2.6倍。表明2%复方中草药试验组效果最佳。经统计分析，C组与A组间差异显著，其他组间差异不显著。
2.2复方中草药对刺参AKP活性的影响
从图2可见：复方中草药同样能提高刺参体腔液中AKP活性。在口服后24d内AKP活性随时间延长而上升，在第24天时，C组AKP活性最高，为3.05金氏单位/100mL，是A组的2.52倍；经统计分析，C组与A组间差异显著，其他组间差异不显著。
2.3复方中草药对刺参NOS活性的影响
饲料中添加复方中草药不同程度地提高了刺参体腔液NOS活性，见图3。各试验组在投喂后24d内，NOS活性呈现的是先升高后降低。口服后第18天，B组NOS活性为10.76U/mL，是A组的8.54倍。经统计分析，B组与A组间差异显著，其他组间差异不显著。
2.4复方中草药对刺参SOD活性的影响
从图4可见：复方中草药各试验组在投喂后24d内刺参体腔液中SOD活性均升高，活性随时间延长而降低。在口服后第18天以C组SOD活性最高，为137.08U/mL，是A组的2.25倍；C组与A组间差异显著，而其他组差异不显著。
3讨论
3.1复方中草药对刺参ACP、AKP、NOS和SOD活性的影响
ACP和AKP都是溶酶体的重要组成部分，其中ACP是巨噬细胞溶酶体的标志酶。试验用ACP的活性表示吞噬细胞清除异物的能力。结果表明：口服不同剂量复方中草药后24d内刺参体腔液ACP活性均比对照组高，2%复方中草药试验组效果最佳；口服后第14天酶活性达到最大值，之后逐渐下降，这可能与免疫疲劳有一定关系，关于其内在机制还需要进一步的研究。AKP生物学意义重大，不仅在细胞膜上较为活跃，在体能细胞代谢过程中也具有重要作用。试验中AKP酶活性随时间的延长而升高，口服第18天后上升的速度有所下降，2%复方中草药试验组效果最佳。孙永欣在刺参AKP酶活性试验中注射不同剂量黄芪多糖，活性是先升高后降低，且0.6mg/头组活性最高。
饲料中添加1%的复方中草药提高了刺参体腔细胞NOS活性。NOS催化L-精氨酸，在体内合成与多种免疫活性有关的内源性NO，从而改变机体的免疫能力，包括通过阻止DNA、蛋白和脂质合成而具有的抗菌和抗病毒活性。
SOD活性可作为机体健康状况的反映指标之一，进而成为免疫系统的反映指标。试验中口服不同剂量复方中草药提高了刺参体腔液中SOD活性，增强抗氧化能力，这与黄芪成分中的黄酮和皂甙消除氧自由基的作用相关。酶活性先升高后降低的趋势，与樊英等给刺参注射黄芪多糖对免疫影响的研究一致。黄芪对史氏鲟作用的研究证明，它对机体的影响有益，SOD活性升高，脂质过氧化物的生成减少。
3.2复方中草药对刺参的免疫调节作用
刺参一旦发病，发病急、病程短且病死率高，用抗生素治疗效果不理想，所以预防是主要措施之一。由于刺参特异性免疫系统不完善，因此要提高刺参的免疫力就必须提高刺参的非特异性免疫力。
中草药具有成本低、药效好且无残留的特点，可作为免疫增强剂添加在刺参饲料中，对于提高刺参的免疫力和减少疾病的发生有一定作用。孟庆大等针对刺参腐皮综合征筛选出由当归、川芎、刺五加、穿心莲、大蒜和甘草等8味中药组成的中草药免疫增强剂，按1%添加到基础饲料中，对刺参有较好的免疫增强作用。吴亚楠等以黄芪和党参为主药加上甘草和当归等5味中草药，饲养刺参结果表明：1.5%添加量可以显著提高其免疫力和抗病力。多糖是黄芪的主要活性成分之一，另外还含有黄酮、胆碱、氨基酸、蔗糖、微量叶酸及微量元素等物质。郭文婷等以黄芪为主药，配以淫羊藿、党参和大黄等中草药添加到饲料中投喂对虾，发现试验组虾酚氧化酶、过氧化氢酶和抗菌活力都显著高于对照组。刘红柏等研究证实，黄芪能够不同程度地增强史氏鲟的非特异性免疫力；而黄芪皂苷在抗氧化、抗衰老、抗肿瘤及增强免疫等方面也有显著活性。
试验中按照中医学的理论以黄芪为主药，辅以甘草、当归、五味子和野菊花四味药佐之。结果表明：2%复方中草药试验组对提高刺参的非特异性免疫力效果最佳，可以在刺参养殖中推广使用。
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