经过40～45小时的暂养后，每隔3小时检查1次雌鳝的成熟及发育情况，直到注射后75小时左右止。检查的方法是：用手触摸雌鳝的腹部，并前后移动，当有卵粒游离的感觉时，便可进行人工授精。
人工授精的方法是：挑出成熟的雌鳝，一手用干毛巾握住其前部，另一手由前向后挤压腹部，将或熟卵挤出并置于玻璃缸或瓷盆中，若遇到有泄殖腔填塞现象时，可在泄殖腔处向里剪开0.5～1厘米的开口后再挤，连续挤压多次，使其产空为止。挤完卵后即将雄鳝杀死，取出精巢，用剪刀快速充分剪碎后放入挤出的卵中，充分搅拌，并加入任氏液约200毫升，放置5分钟后，再加清水洗去精巢碎片和血污，完成人工授精后即放入孵化器中进行孵化。
